彩超在小鼠原位肝癌移植模型中的應用研究

摘要：

目的：

研究應用彩超評價小鼠原位肝癌移植造模成功的可行性。方法：建立小鼠肝癌原位移植模型， 應用彩超方法觀察(3、5、9、16d)不同造模時間小鼠肝癌原位移植造模情況，同時與解剖觀察腫瘤比較；并取 其腫瘤作病理組織學檢查。結果：彩超在模型建立中后期9d組腫瘤的檢測結果與解剖觀察情況相近，腫瘤檢出率 可達90％。結論：彩超檢測方法是一種無創(chuàng)診斷，可用于小鼠原位肝癌模型的實時評價，為建立小鼠原位移植肝癌 模型的判定提供科學依據(jù).畢業(yè)論文www.szmdbiao.com

關鍵詞：彩超；小鼠原位肝癌；模型

目前，肝癌治療措施強調實行綜合治療，即通過 西醫(yī)、中醫(yī)及其他有效的手段和方法相結合的綜合 治療。中醫(yī)藥在防治肝癌發(fā)生，減少復發(fā)，減輕放、 化療的毒副作用，提高生存質量，延長生存期等方面 有獨特的優(yōu)勢，隨著醫(yī)藥科技的發(fā)展，中醫(yī)藥治療肝 癌的臨床療效不斷提高，并且也從多方面展開藥物 作用機理的研究。本文開展應用現(xiàn)代臨床醫(yī)療的彩 超技術評價小鼠肝癌原位移植模型，試圖為中醫(yī)藥 臨床防治肝癌藥物的藥效實驗研究提供研究手段及 其新的評價方法。本研究也是國家自然基金項目中 藥復方靶向給藥系統(tǒng)研究的一部分.

材料與方法

1．實驗材料小鼠H22肝癌瘤株：中國協(xié)和藥 物所提供；清潔級ICR／b鼠，雄性，6—8周齡，體質量 18—229：由吉林大學實驗動物中心提供，動物合格證 號10—1023；BCN一1 360超凈1=作臺Jouan公司；KX一41 倒置生物旺微鏡，日本OLYMPUS生產；IU22彩超機， Phllips公司.

2．實驗方法

2．1小鼠原位肝癌模型的建立及分組取腹腔 接種H22肝癌細胞株后7d的昆明種小鼠。無菌抽取H22 肝癌細胞株腹水，生理鹽水洗滌，離一31 000 r／rain，5min 棄上清，臺盼藍染色計數(shù)，生理鹽水調整癌細胞數(shù)至 1×108／ml備用。健康昆明種小鼠，戊巴比妥鈉腹腔注 射麻醉，小鼠仰臥固定，備皮，常規(guī)消毒鋪巾，于上腹正 中劍突下作一約Icm的切口。輕壓雙側肋弓以擠出部分肝葉，濕紗布墊于肝葉下方以保護’然后用0．25ml醫(yī) 用注射器針頭沿肝葉長軸方向插人緩慢注入H22肝 癌細胞懸液0．03ml(細胞數(shù)為3×106)。在拔出針頭的 同時，迅速用棉簽輕壓lmin止血，然后在針眼周嗣用 酒精棉球輕搽。小心地將肝臟網納入腹腔，縫合切口， 術畢【lI。術后正常飲水、進食。術后將造模動物隨機4 組，即模型3d組，模型5d組，模型9d組，模型16d組， 另設正常對照組。正常組動物同樣手術方法給予生 理鹽水造模.

2．2彩超對小鼠肝癌造模的檢測實驗動物分4 次進行B超檢測，每次取5只正常組進行對照，分別于 造模第3、5、9、16H將正常對照組和模型組小鼠腹部 剪毛處理，用彩超儀對小鼠肝臟進行掃描，選擇最 適宜條件。彩超檢測條件：深度：2．0，增益指數(shù)74％， 探頭頻率7．5—12MHz。隨后，脫椎處死小鼠，開腹用 游標卡尺測量腫瘤大小，并與彩超結果進行對照.

2．3病理形態(tài)學觀察剝離肝臟及其腫瘤，10％ 甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，在光學顯 微鏡下進行組織學檢查.

結果

1．彩超檢測與解剖肉眼觀察結果正常組小鼠 肝臟彩超檢測結果表明：超聲顯示弱回聲，無結節(jié)； 正常小鼠解剖肝臟表明：肝臟無結節(jié)。模型組小鼠肝 臟超聲與解剖檢測結果表明：小鼠原位移植肝癌存 在高回聲、等回聲、低回聲3種類型，其中以高回聲多 見并較易發(fā)現(xiàn)和測量。當腫瘤生長3d時，有50％／b鼠 生長出平均0．2cm×0．14cm大小的結節(jié)，此ft,寸B超顯 示10只小鼠均無結節(jié)；當造模第5天時，有l(wèi)OO％／Jx鼠 長出平均o．57cmx0．43em大小不等的結節(jié)或腫塊，并 有1只呈彌漫性生長，彩超僅檢查出一只實際大小在 0．29emx0．29em的腫瘤，檢出率占總數(shù)的10％；當造 模第9天時，有100％／1\"鼠長出平均0．89cmx0．43era， 彩超的檢出率可達90％；至第16天時，有100％d、鼠長 出0．89emx0．66em的腫瘤并且小鼠多伴有腹水，此時 彩超的檢出率仍為90％。結果見表l、圖l.

    表1 彩超與解剖觀察不問時間小鼠原位移植肝癌情況∞=10) 彩超檢查解剖觀察造模天數(shù)麗面天萬可忑夏二了蕊麗看夭不ii忑i再再薄 2．病理學檢測結果正常組小鼠肝d,nf清晰， 肝細胞索、肝竇排列整齊，匯管區(qū)結構清楚；肝癌模 型組腫瘤細胞生長旺盛，較為彌散，細胞核體積較 大，深染，多呈圓形或橢圓形，胞漿豐富略嗜堿性， 有的胞漿呈空泡狀，可見病理性核分裂與瘤巨細胞， 見圖1.

討論

目前，建立小鼠肝癌動物模型方法主要有皮下 移植和肝癌的原位移植，而肝癌的原位移植能夠更 好地模仿人肝癌體內的血供和生長環(huán)境，提供與肝 癌病人相似的肝癌生物學特性，更好地反映抗癌藥 物的藥效學指標。但此種方法要求接種手法準確， 對操作環(huán)境要求必須無菌，尤其此種模型建立是否 成功常采用動物處死后評價。這是大多數(shù)研究者謹 慎采用此方法的原因之。目前，采用小鼠原位肝癌 移植模型進行抗腫瘤藥物研究，缺少行之有效的模 型建立評價方法.

彩超是根據(jù)形態(tài)學的改變?yōu)榕R床診斷疾病提供證據(jù)的，它不像病理那樣作出準確的診斷，但一些疾 病在超聲顯像中有特殊表現(xiàn)，并且具有活體、實時、 動態(tài)的優(yōu)點。肝癌的聲像圖有其規(guī)律性，根據(jù)這些變 化的規(guī)律，目前臨床上彩超檢查是常用的診斷方法。上常用的彩超機對于實驗有使用方便，容易獲 得的優(yōu)點，因此，本實驗用臨床用彩超機對小鼠原位 移植肝腫瘤模型建立進行評價，探討用其評價小鼠 原位肝腫瘤的可行性.

實驗結果表明：彩超在對小鼠原位肝癌移植模型 建立的初期(0-5天)評價效果并不理想，檢出率僅為 10％，但在腫瘤生長成熟期(大于0．57era x 0．43era)對 腫瘤的檢出率有了明顯的提高，檢出率可達到90％.

臨床用彩超機在小鼠原位肝癌移植模型的建立過程 中適用于腫瘤成熟期的評價.臨床用彩超機探頭的常用頻率范圍為l一15 MHz，最高頻率為40 MHz，而用于小動物實驗檢測的 高頻率超聲系統(tǒng)探頭頻率為12．5—82．5MHz，平均中 心頻率為40 MHz，本實驗發(fā)現(xiàn)臨床用彩超機探頭頻 率較低，因此如能夠采用高頻率的探頭將會提高實 驗的檢出率和準確度.

對小鼠原位肝癌移植模型的評價采用彩超手段 是一種無創(chuàng)診斷和監(jiān)澳fl／b鼠肝癌原位腫瘤的可行檢 測方法，可為中醫(yī)臨床防治肝癌藥物實驗用小鼠肝 癌原位腫瘤模型建立的判斷提供科學依據(jù)。此檢測 方法也可用于其它實驗動物肝癌模型建立的評價.

參考文獻

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