豬腦心肌炎病毒VP2蛋白單克隆抗體的制備及其識(shí)別表位分析

為獲得針對(duì)豬源EMCV結(jié)構(gòu)蛋白VP2的特異性單克隆抗體,本試驗(yàn)以EMCV結(jié)構(gòu)蛋白VP2為對(duì)象,將EMCV BJC3株VP2基因定向插入穿梭質(zhì)粒中,構(gòu)建重組腺病毒AdV-VP2,免疫BALB/c小鼠制備單克隆抗體,利用Pepscan技術(shù)對(duì)單抗識(shí)別的抗原位點(diǎn)進(jìn)行分析.結(jié)果顯示,間接ELISA及間接免疫熒光法篩選獲得了2個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞克隆株,命名為C11和G8.經(jīng)檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清抗體效價(jià)為1:1 600,腹水效價(jià)分別為1:2.56×106和1:1.28×106,中和試驗(yàn)鑒定均無(wú)中和活性.Western-blot鑒定表明獲得的2株單抗均能識(shí)別原核表達(dá)的重組VP2蛋白.亞類(lèi)鑒定結(jié)果顯示2株單抗均為IgG2b亞類(lèi),輕鏈均為κ型.Pepscan分析結(jié)果顯示,這2株單抗可分別識(shí)別EMCV VP2蛋白上的2個(gè)B細(xì)胞線性表位.本研究獲得的蛋白十分接近于其天然構(gòu)象,很大程度上保證了病毒表面抗原位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)和功能.

作 者： 魏瑩 蓋新娜 賈紅 郭鑫 楊漢春 WEI Ying GE Xin-na JIA Hong GUO Xin YANG Han-chun   作者單位： 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部人畜共患病重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室,北京,100094  刊 名： 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)  英文刊名： CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY  年，卷(期)： 2009 17(1)  分類(lèi)號(hào)： S852.65  關(guān)鍵詞： 腦心肌炎病毒   VP2蛋白   單克隆抗體   表位識(shí)別  

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