牛皰疹病毒Ⅰ型ul49(VP22)基因的序列分析及其表達(dá)

以牛疤疹病毒Ⅰ型(BHV-Ⅰ)國(guó)內(nèi)地方分離株感染的細(xì)胞培養(yǎng)物制備PCR模板,擴(kuò)增出大小約0.77kb的u149基因完整編碼區(qū)片段,將擴(kuò)增片段克隆到pMD18-T載體中,獲得含u149基因的重組質(zhì)粒pMD-VP22.采用雙脫氧末端終止法進(jìn)行序列測(cè)定,發(fā)現(xiàn)與國(guó)外Cooper株u14g基因序列完全一致,說(shuō)明u149基因相當(dāng)保守.進(jìn)一步將BHV-Ⅰu149完整編碼區(qū)片段插入原核表達(dá)載體pET-28a和真核表達(dá)載體pEGFP-C1中,獲得分別與6xHis融合的原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28aVP22和與EGFP融合的真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFPVP22.將pET-28aVP22轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo),SDS-PAGE電泳檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在38kDa處有一條特異性的表達(dá)帶.利用脂質(zhì)體介導(dǎo),將pEGFPVP22轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞,經(jīng)G418加壓篩選,獲得穩(wěn)定表達(dá)VP22的細(xì)胞克隆.在倒置熒光顯微鏡直接檢測(cè)未固定的活細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)pEGFPVP22轉(zhuǎn)染細(xì)胞能發(fā)出很強(qiáng)的熒光并主要集中在細(xì)胞核中,而對(duì)照載體pEGFP-C1轉(zhuǎn)染細(xì)胞的熒光分布于胞漿.

作 者： 余曉嵐 肖少波 方六榮 金梅林 陳煥春   作者單位： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院,湖北,430070 刊 名： 畜牧市場(chǎng) 英文刊名： STOCKBREEDING MARKET 年，卷(期)： 2009 ""(10) 分類號(hào)： S8 關(guān)鍵詞： 牛皰疹病毒Ⅰ型   ul49基因   克隆   序列分析   表達(dá)  

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