VEGF165和VEGF121在MC3T3-E1細(xì)胞中的表達(dá)及生物學(xué)功能

目的:構(gòu)建一個(gè)能在MC3T3-E1細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá),并具有生物學(xué)活性的VEGF165和VEGF121基因表達(dá)載體.方法:采用RT-PCR技術(shù)從HL-60細(xì)胞中擴(kuò)增人VEGF165和VEGF121基因,將獲得的基因定向插入pcDNA3.1(+)真核表達(dá)質(zhì)粒中,測(cè)序正確后用脂質(zhì)體將表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入MC3T3-E1細(xì)胞.細(xì)胞經(jīng)G418加壓有限稀釋篩選,采用ELISA法、Western blot法及免疫熒光法檢測(cè)VEGF蛋白表達(dá),并用MTT法檢測(cè)表達(dá)的蛋白對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞株(HUECV304)的增殖活性影響.結(jié)果:通過(guò)基因測(cè)序表明獲得的VEGF165和VEGF121與GeneBank登錄的序列一致,構(gòu)建的質(zhì)粒分別為VEGF165/pcDNA3.1(+)質(zhì)粒和VEGF121/pcDNA3.1(+)質(zhì)粒,ELISA及Western blot檢測(cè)結(jié)果均表明VEGF165和VEGF121基因轉(zhuǎn)染MC3T3-E1后能在細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物能明顯促進(jìn)HUECV304細(xì)胞生長(zhǎng).結(jié)論:基因轉(zhuǎn)染的MC3T3-E1細(xì)胞能穩(wěn)定、高效表達(dá)具有生物學(xué)活性的VEGF165和VEGF121重組蛋白.

作 者： 賀俊 王慧明 姚航平 HE Jun WANG Hui-ming YAO Hang-ping   作者單位： 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院,附屬第一醫(yī)院,浙江,杭州,310003  刊 名： 浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)  年，卷(期)： 2006 35(3)  分類號(hào)： Q813  關(guān)鍵詞： 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子類/代謝   血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子類/遺傳   3T3細(xì)胞   基因表達(dá)   轉(zhuǎn)染   質(zhì)粒  

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