嗜熱酯酶APE1547催化活性的定向進(jìn)化研究

對(duì)來(lái)源于嗜熱古菌Aeropyrum pernix的酯酶(APE1547)催化活性進(jìn)行定向進(jìn)化研究.利用APE1547特殊的穩(wěn)定性,建立了準(zhǔn)確的高通量高溫酯酶篩選方法.對(duì)第一代隨機(jī)突變庫(kù)篩選獲得了催化活性較野生型提高1.5倍的突變體M010,序列分析表明其氨基酸突變?yōu)镽526S.從第二代突變庫(kù)中篩選出的總活力提高5.8倍突變體M020,突變位點(diǎn)為R526S/E88G/A200T/I519L,其比活力與M010一致,但表達(dá)量比野生型提高約4倍.對(duì)M020酶學(xué) 性質(zhì)表征發(fā)現(xiàn),其最適pH為8.5,比野生型向堿性偏移0.5;活性中心殘基酸性基團(tuán)的解離常數(shù)(pK1)由野生型的7.0提高至7.5.晶體結(jié)構(gòu)分析表明,突變位點(diǎn)R526距離活性中心較近,將其突變?yōu)镾er降低了活性中心的極性,抑制了催化殘基His的解離,使酸性基團(tuán)的解離常數(shù)升高.

作 者： 王秋巖 楊廣宇 劉艷莉 王艷平 馮雁 WANG Qiu-yan YANG Guang-yu LIU Yan-li WANG Yan-ping FENG Yan   作者單位： 吉林大學(xué),分子酶學(xué)工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,長(zhǎng)春,130023  刊 名： 微生物學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(2)  分類(lèi)號(hào)： Q93  關(guān)鍵詞： 定向進(jìn)化   嗜熱酶   酯酶活力   解離常數(shù)  

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