體外培養(yǎng)人樹突狀細(xì)胞分化成熟特性分析

目的利用人臍血CD34+干細(xì)胞誘導(dǎo)分化樹突狀細(xì)胞(DC),并對DC分化發(fā)育過程的生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定和分析.方法通過SCF、GM-CSF、TGF-β1、Flt-3L及TNF-α體外培養(yǎng)體系,從臍血CD34+造血干細(xì)胞中誘導(dǎo)擴(kuò)增獲得DC.采用倒置顯微鏡和電鏡觀察DC形態(tài)學(xué)特征,流式細(xì)胞儀檢測DC細(xì)胞表型及胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,MTT比色法檢測DC刺激同種異體T細(xì)胞增殖能力;ELISA法檢測DC培養(yǎng)上清液中IL-12含量.結(jié)果CD34+細(xì)胞培養(yǎng)5至7 d,細(xì)胞呈現(xiàn)DC典型樹突狀形態(tài),處未成熟狀態(tài),再經(jīng)TNF-α誘導(dǎo)及繼續(xù)培養(yǎng)至14 d,DC發(fā)育成熟.未成熟DC表達(dá)模式識別受體CD209(DC-SIGN),且胞內(nèi)蓄積適量ROS,具備了細(xì)胞吞噬能力.成熟DC除仍高表達(dá)DC-SIGN,其表面黏附共刺激分子CDllc、CD54、CD83、CD80、CD86表達(dá)上調(diào),細(xì)胞因子IL-12分泌增加,且具明顯的體外刺激T細(xì)胞增殖能力,符合于抗原遞呈細(xì)胞特征.此外,未成熟和成熟DC基本不表達(dá)黏附分子P-、E-選擇素,但未成熟和成熟DC分別高表達(dá)和低表達(dá)L-選擇素.結(jié)論建立人DC體外模型及其分化發(fā)育生物學(xué)特性分析,為進(jìn)一步研究DC功能,以及利用DC調(diào)控免疫應(yīng)答用于疾病防治提供了基礎(chǔ).

作 者： 張玉梅 孫桂芝 周同 趙亞鵬 張雁云 張冬青 陳楠   作者單位： 張玉梅,孫桂芝,周同,趙亞鵬,陳楠(200025,上海,上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瑞金醫(yī)院腎內(nèi)科)

張雁云,張冬青(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海市免疫學(xué)研究所) 

刊 名： 中國微循環(huán)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CHINESE MICROCIRCULATION  年，卷(期)： 2006 10(1)  分類號： Q25  關(guān)鍵詞： 樹突狀細(xì)胞   分化   生物學(xué)特性  

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