雅致枝霉△6-脂肪酸脫氫酶基因的克隆及在釀酒酵母中的表達(dá)

根據(jù)真菌△6-脂肪酸脫氫酶基因保守的組氨酸Ⅱ區(qū)和Ⅲ區(qū)附近保守序列設(shè)計(jì)兼并引物進(jìn)行RT-PCR,得到雅致枝霉(Thamnidium elegans)As3.2806△6-脂肪酸脫氫酶基因459bp部分cDNA序列,然后通過快速擴(kuò)增cDNA末端技術(shù)(RACE)向兩端延伸得到1504bp的△6-脂肪酸脫氫酶基因全長cDNA序列.序列分析表明有一個(gè)1377bp、編碼459個(gè)氨基酸的開放閱讀框TED6.推測的氨基酸序列與已知其他真菌的△6-脂肪酸脫氫酶基因的氨基酸序列比對(duì),具有3個(gè)組氨酸保守區(qū)、2個(gè)疏水區(qū)及N末端細(xì)胞色素b5融合區(qū).將此編碼區(qū)序列亞克隆到釀酒酵母缺陷型菌株INVSc1的表達(dá)載體pYES2.0中,構(gòu)建表達(dá)載體pYTED6,并在釀酒酵母INVSc1中異源表達(dá).通過氣相色譜(GC)和氣相色譜/質(zhì)譜(GC-MS)分析表明,該序列在釀酒酵母中獲得表達(dá),產(chǎn)生γ-亞麻酸(GLA)的含量占酵母總脂肪酸的7.5%.證明此序列編碼的蛋白能將外加的亞油酸轉(zhuǎn)化為γ-亞麻酸,是一個(gè)新的有功能的△6-脂肪酸脫氫酶基因(GenBank,AY941161).

作 者： 王德培 李明春 魏東盛 張穎慧 邢來君 孫偉 WANG De-pei LI Ming-chun WEI Dong-sheng ZHANG Ying-hui XING Lai-jun SUN Wei   作者單位： 南開大學(xué)微生物系,天津市微生物功能基因組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津,300071  刊 名： 微生物學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(1)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 雅致枝霉   △6-脂肪酸脫氫酶基因   γ-亞麻酸   釀酒酵母   表達(dá)  

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