雞新城疫病毒HeB02分離株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究

根據(jù)GenBank報(bào)道的雞新城疫病毒F基因序列設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,以雞新城疫病毒HeB02分離株基因組為模板,通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增出了1.66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因與國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株F48 E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核苷酸序列的同源性分別為88.1%、84.9%和83.8%.將HeB02株F基因插入真核表達(dá)載體pVAX1中,構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒pSV-F,通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,SDS-PAGE分析可見(jiàn)表達(dá)的特異蛋白條帶;Western blot、ELISA和中和試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果表明:真核表達(dá)的蛋白與抗新城疫病毒的抗體發(fā)生特異性反應(yīng),說(shuō)明F蛋白具有很好的免疫原性.采用活體電擊法以真核表達(dá)質(zhì)粒pSV-F免疫3周齡SPF雞,劑量為50μg/只,3周后加強(qiáng)免疫1次,5周后以100倍雞胚感染劑量(EID)的F基因同源病毒對(duì)所有雞進(jìn)行攻毒,攻毒前后每周分別以喉拭子進(jìn)行病毒分離和HI效價(jià)測(cè)定.結(jié)果顯示對(duì)照組在攻毒前一直沒(méi)有檢測(cè)到抗體效價(jià),攻毒后檢測(cè)效價(jià)為3.0 log2±1.40,并且于攻毒后第9天全部死亡;活疫苗組和實(shí)驗(yàn)組免疫后第2周檢測(cè)到抗體效價(jià),第5周最高,HI效價(jià)分別為8.3 1og2±1.30和7.2log2±1.23,攻毒1周后HI效價(jià)分別達(dá)9.8log2±1.55和8.9log2±1.77,極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01).免疫組未分離到新城疫病毒,對(duì)照組全部分離到新城疫病毒.表明所構(gòu)建的F基因真核表達(dá)質(zhì)�？勺鳛楹蜻x基因疫苗誘導(dǎo)雞產(chǎn)生免疫保護(hù)反應(yīng).

作 者： 李楠 孫一敏 趙寶華 LI Nan SUN Yi-Min ZHAO Bao-Hua   作者單位： 河北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,石家莊,050016  刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號(hào)： Q785  關(guān)鍵詞： 新城疫病毒   F基因   克隆和表達(dá)   DNA疫苗  

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