VEGF重組質(zhì)粒pcDNA/V的構(gòu)建及其在大鼠急性心肌缺血模型中的表達(dá)

構(gòu)建人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF165)真核表達(dá)載體,并研究其在細(xì)胞水平和大鼠急性心肌梗死動(dòng)物模型中的表達(dá).利用RT-PCR方法,從人扁桃體組織中擴(kuò)增人VEGF165基因,構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA/V.應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù),將pcDNA/V轉(zhuǎn)染至人胚腎細(xì)胞(293細(xì)胞)中,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的重組質(zhì)粒細(xì)胞克隆.ELISA、Western blot檢測(cè)證實(shí)重組質(zhì)粒pcDNA/V能在293細(xì)胞中高效表達(dá)外源VEGF基因,雞胚絨毛尿囊膜血管生成實(shí)驗(yàn)證實(shí)表達(dá)產(chǎn)物具有促血管生成的活性.進(jìn)一步的體內(nèi)表達(dá)研究,建立大鼠急性心肌梗死模型,將重組質(zhì)粒pcDNA/V、空質(zhì)粒pcDNA3.1(+)分三點(diǎn)注射于梗死交界處心肌內(nèi),四周后取材.經(jīng)免疫組化染色檢測(cè),pcDNA/V組在梗死交界區(qū)有VEGF陽(yáng)性表達(dá);電鏡觀察顯示,pcDNA/V組在梗死交界處心肌細(xì)胞間有大量毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:成功克隆了人VEGF165基因,構(gòu)建了其真核表達(dá)載體.體內(nèi)、外表達(dá)研究證實(shí)重組質(zhì)粒的表達(dá)產(chǎn)物具有促血管生成的生物學(xué)活性,為VEGF基因治療缺血性心肌病的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).

作 者： 王雅梅 劉冰 孫麗翠 閆豫東 司楊 祁雅慧 WANG Ya-Mei LIU Bing SUN Li-Cui YAN Yu-Dong SI Yang Qi Ya-Hui   作者單位： 首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,北京,100054  刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(2)  分類(lèi)號(hào)： Q785  關(guān)鍵詞： 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子   真核表達(dá)載體   基因表達(dá)   心肌梗死  

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