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DAB389-Linker-LHRH重組毒素的構(gòu)建及生物活性的初步測定
采用基因工程方法,將白喉毒素的毒性部分(DAB389)通過柔性連接肽(Linker)與促黃體激素釋放素(LHRH)基因連接起來,克隆到高效表達載體pET28a(+)中,并在大腸桿菌中表達該融合蛋白(DAB389-Linker-LHRH).通過三步層析純化目的蛋白,獲得了純度達95%的重組毒素DAB389-Linker-LHRH.用MTT法檢測其對過度表達LHRH受體的人宮頸癌HeLa細胞的毒性作用,探討其對HeLa細胞的特異殺傷情況.實驗結(jié)果顯示DAB389-Linker-LHRH對HeLa細胞具有很強的生長抑制作用,其IC50為12.93 μg/ mL.表明該免疫重組毒素在體外對人宮頸癌HeLa細胞具有明顯的殺傷作用,為進一步研制對宮頸癌有特異治療作用的靶向抗癌藥物奠定了基礎(chǔ).
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