奧利亞羅非魚促性腺激素釋放激素cDNA的原核表達及其免疫原性研究

促性腺激素釋放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘腦分泌產(chǎn)生的神經(jīng)激素,對脊椎動物生殖的調(diào)控起重要作用.為研究GnRH對奧利亞羅非魚性腺發(fā)育的作用,構(gòu)建了GnRH cDNA的原核表達載體并進行融合表達.利用RT-PCR方法從丘腦中擴增出長約400bp的目的序列GnRH基因,克隆至T載體中,經(jīng)酶切鑒定和序列測定分析確認序列的正確性后將此片段克隆到表達載體pMAL-c2x中構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pMAL-GnRH,并在大腸桿菌TB1中獲得了高表達,目的蛋白約占菌體總蛋白的41.6%.菌體經(jīng)溶菌酶裂解,制備無細胞抽提液,Amylose-sepharose柱層析后得到分子量為56kD單一條帶的目的蛋白.目的蛋白經(jīng)Factor Xa酶切裂解,Amylose-sepharose過柱純化后得到純化的GnRH前體蛋白.以80μg/只的劑量4次免疫ICR小鼠,免疫小鼠可以檢測到特異性針對GnRH前體蛋白的血清抗體應答,免疫組抗體水平顯著高于空白組(P＜0.05),且加強免疫第5周后抗體效價為0.707±0.320,達到高峰值,說明表達產(chǎn)物具有免疫原性,可以刺激機體產(chǎn)生免疫應答.

作 者： 丁煒東 曹麗萍 吳婷婷 DING Wei-Dong CAO Li-Ping WU Ting-Ting   作者單位： 中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心,農(nóng)業(yè)部水生動物遺傳育種和養(yǎng)殖生物學重點開放實驗室,無錫,214081  刊 名： 生物工程學報  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(4)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： 奧利亞羅非魚   促性腺激素釋放激素   促性腺激素釋放激素相關(guān)肽   原核表達   抗體   免疫原性  

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