噬菌體展示技術(shù)篩選DNA錯配修復蛋白MutS高親和性抗體

目的制備MutS的高親和抗體,以有利于MutS的檢測及應用.方法利用IPTG的誘導作用,在E.coli中誘導表達目標蛋白MutS.利用親和層析方法獲得目標蛋白,并利用凝膠阻滯實驗分析其活性.將MutS作為抗原,在Tomlinson抗體庫中利用噬菌體展示技術(shù)來篩選MutS的高親和力噬菌粒.將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌后,誘導表達并通過親和層析的方法來獲得可溶性的抗體片段,并檢測其親和力.結(jié)果純化后的MutS具有識別、結(jié)合錯配DNA雙鏈的活性.ELISA分析表明,利用噬菌體展示技術(shù)可獲得MutS高親和力的噬菌粒.將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌HB2151后,誘導表達并純化到抗體片段,其親和力為0.9×108 L/mol.結(jié)論利用噬菌體展示技術(shù)篩選到MutS高親和力的抗體.

作 者： 劉俊 全智勇 劉建華 LIU Jun QUAN Zhi-yong LIU Jian-hua   作者單位： 上海交通大學生命科學與技術(shù)學院,上海,200240  刊 名： 復旦學報（醫(yī)學版）  ISTIC PKU 英文刊名： FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 33(4)  分類號： Q81  關(guān)鍵詞： 噬菌體展示   DNA錯配修復蛋白MutS   可溶性抗體片段  

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