人趨化因子巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α的克隆與原核表達(dá)

目的克隆人趨化因子MIP-3 alpha基因,表達(dá)并初步純化MIP-3 alpha融合蛋白.方法從人扁桃體中提取總RNA,再進(jìn)行RT-PCR,擴(kuò)增MIP-3 alpha成熟蛋白基因,并在5'和3'端分別添加NcoI和EcoRI酶切位點(diǎn),通過與之對(duì)應(yīng)的存在于pET32a(+)質(zhì)粒上的酶切位點(diǎn)重組于pET32a(+)載體上,轉(zhuǎn)化E.coli BL21trxB(DE3),篩選陽性克隆,酶切鑒定,DNA測(cè)序檢測(cè)插入序列的正確性,缺失突變MIP-3 alpha序列前端多余堿基,獲得MIP-3 alpha天然蛋白表達(dá)載體pET32a(+)/MIP-3 alpha,SDS-PAGE分析其表達(dá),Westem Blot驗(yàn)證融合蛋白.大量表達(dá)并初步純化MIP-3 alpha融合蛋白.結(jié)果成功克隆了MIP-3 alpha基因,表達(dá)并初步純化得到MIP-3alpha融合蛋白.結(jié)論在大腸桿菌中成功構(gòu)建的MIP-3 alpha硫氧還蛋白融合表達(dá)載體,以可溶性蛋白的方式表達(dá)MIP-3 alpha硫氧還蛋白.

作 者： 顧濤 羅�？� 沈大斌 龔小云 鄭紅   作者單位： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院綜合實(shí)驗(yàn)研究中心,重慶400038  刊 名： 重慶醫(yī)學(xué)  ISTIC PKU 英文刊名： CHONGQING MEDICINE  年，卷(期)： 2006 35(4)  分類號(hào)： Q785  關(guān)鍵詞： MIP-3 alpha   融合表達(dá)   pET32a(+)質(zhì)粒   蛋白純化  

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