AcAPc2自剪切融合蛋白表達載體pTWIN1-AcAPc2的構(gòu)建和表達

為表達和獲取具有抗凝血功能的犬鉤蟲抗凝血肽(AcAPc2 ),采用搭橋PCR方法合成犬鉤蟲抗凝血肽全長雙鏈cDNA序列,AcAPc2 cDNA全序列連入表達載體pTWIN1上構(gòu)建成具有蛋白自剪切功能的表達載體pTWIN1-AcAPc2,將陽性重組子轉(zhuǎn)入表達型大腸桿菌E.coli ER2566進行表達.表達的融合蛋白AcAPc2-intein2-CBD為可溶性蛋白,且融合蛋白約占菌體總蛋白的30.1%,經(jīng)蛋白質(zhì)印跡分析確定表達產(chǎn)物是具有CBD蛋白的特異性融合蛋白.融合蛋白AcAPc2-intein2-CBD經(jīng)幾丁質(zhì)柱高效親和純化,并經(jīng)β-巰基乙醇誘導的獨特的在柱自剪切后,得到目的蛋白AcAPc2,經(jīng)SDS-PAGE分析在21 KD處呈現(xiàn)目的條帶,所得的可溶性AcAPc2分子量符合其天然活性的二聚體形式.對AcAPc2表達和純化工藝上的改進,方便了AcAPc2的獲取, AcAPc2氨基酸序列的生物信息學分析初步闡明了AcAPc2的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系,為進一步研究AcAPc2的抗凝血機制及其作為抗凝血藥的臨床應用奠定了基礎.

作 者： 楊博 陳守春 童煜 覃揚 Yang Bo Chen Shouchun Tong Yu Qin Yang   作者單位： 楊博,覃揚,Yang Bo,Qin Yang(四川大學,基礎與法醫(yī)學院,生物化學與分子生物學教研室,成都,610041)

陳守春,童煜,Chen Shouchun,Tong Yu(地奧集團藥物研究所,基因工程藥物研究室,成都,610041) 

刊 名： 生物醫(yī)學工程學雜志  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF BIOMEDICAL ENGINEERING  年，卷(期)： 2006 23(3)  分類號： Q5  關(guān)鍵詞： 原核克隆與表達   犬鉤蟲抗凝血肽c2   pTWIN1質(zhì)粒  

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