人CIDE-3基因原核表達載體的構(gòu)建及蛋白的初步表達

目的: 構(gòu)建人CIDE-3基因的原核表達載體, 并在E.coli BL21(DE3)中表達.方法: 提取人肝母細胞瘤細胞系HepG2細胞的總RNA, 經(jīng)RT-PCR擴增人CIDE-3基因片段, 并將其克隆入原核表達載體pET28a(+)中, 構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a(+)-CIDE-3.經(jīng)限制性內(nèi)切酶BamH I、 Xho I雙酶切鑒定及序列測定后, 轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3), 經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達組氨酸融合蛋白.結(jié)果: 獲得全長為516 bp的人CIDE-3基因片段.以構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET28a(+)-CIDE-3轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)后, 經(jīng)IPTG誘導(dǎo), 表達出相對分子質(zhì)量(Mr)約為23 000的重組CIDE-3蛋白.SDS-PAGE分析顯示, 表達的蛋白主要以不溶性包涵體的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞質(zhì)中, 表達量約占全菌蛋白的32%.結(jié)論: 成功地構(gòu)建了原核表達載體pET28a(+)-CIDE-3, 并表達出重組CIDE-3蛋白, 為進一步多克隆抗體的制備和凋亡的相關(guān)研究奠定了實驗基礎(chǔ).

作 者： 姚麗 李青 李蓬 張靜 葉菁 陳廣生 王淑芳 YAO Li LI Qing LI Peng ZHANG Jing YE Jing CHEN Guang-sheng WANG Shu-fang   作者單位： 姚麗,李青,張靜,葉菁,陳廣生,王淑芳,YAO Li,LI Qing,ZHANG Jing,YE Jing,CHEN Guang-sheng,WANG Shu-fang(第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院病理科,陜西,西安,710032)

李蓬,LI Peng(香港科技大學(xué)生物系,香港) 

刊 名： 細胞與分子免疫學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(2)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： CIDE-3   基因克隆   原核表達  

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