乙酰肝素酶大亞基在畢赤酵母中的表達(dá)

目的 構(gòu)建乙酰肝素酶(HPA)大亞基片段真核表達(dá)質(zhì)粒,并在畢赤酵母中表達(dá)重組蛋白.方法 根據(jù)GenBank中登錄的HPA大亞基基因序列設(shè)計(jì)引物,PCR方法擴(kuò)增肝素酶基因,構(gòu)建畢赤酵母真核表達(dá)質(zhì)粒pPICZαA-HPA.電擊穿孔法轉(zhuǎn)化感受態(tài)畢赤酵母SDM1168,斑點(diǎn)免疫印跡法篩選重組菌株,PCR法鑒定陽性克隆.甲醇誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,Western blot鑒定表達(dá)產(chǎn)物.結(jié)果 構(gòu)建的重組真核表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)雙酶切及測序鑒定證明構(gòu)建正確;斑點(diǎn)免疫印跡法篩選出的9個(gè)單菌落經(jīng)PCR擴(kuò)增,均可見1 161 bp的目的基因條帶;表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Western blot分析,具有良好的反應(yīng)原性,表達(dá)量約為μg/L.結(jié)論 已成功構(gòu)建了HPA大亞基片段真核表達(dá)質(zhì)粒pPICZαA-HPA,并在畢赤酵母SDM1168中分泌表達(dá)了HPA大亞基.

作 者： 季穎 邱偉成 高新 付潔 王清清 宋海峰   作者單位： 季穎,高新,付潔,王清清,宋海峰(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所,北京,100850)

邱偉成(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所,北京,100850;首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,北京,100048) 

刊 名： 中國生物制品學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS  年，卷(期)： 2010 23(3)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 乙酰肝素酶   大亞基   畢赤酵母   表達(dá)   Heparanase (HPA)   C-terminal subunit   Pichia pastoris   Expression  

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