人防御素-5基因的克隆和真核表達載體的構建

目的 對人防御素5(HD-5)基因進行克隆,構建真核表達載體HD5-pPICZαA.方法 從人cDNA文庫中PCR擴增HD-5基因片段,用EcoR I和Xba I分別雙酶切HD-5基因擴增產(chǎn)物和畢赤酵母表達載體pPICZαA,用T4DNA連接酶連接目的 基因片段和pPICZαA,然后轉化到E.coil Top10中,Zeocin篩選轉化子并進行PCR、酶切和序列鑒定.結果 提取陽性克隆的重組質粒,EeoR I和xba I雙酶切后跑電泳獲得預期條帶;同時重組質粒經(jīng)序列測定,證實HD-5基因正確插入pPICZαA中,插入位置、方向均正確.結論 成功構建人防御素5基因的真核表達載體HD5-pPICZαA,為HD-5蛋白的真核真核表達奠定基礎.

作 者： 陸航 李華 吳學敏 單穎   作者單位： 陸航(遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院普外科,遼寧錦州,121000)

李華(遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院腫瘤科,遼寧錦州,121000)

吳學敏,單穎(遼寧醫(yī)學院免疫與病原生物學教研室,遼寧錦州,121000) 

刊 名： 解剖科學進展  ISTIC 英文刊名： PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2010 16(3)  分類號： Q782  關鍵詞： 人防御素-5   克隆   表達載體   畢赤酵母  

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