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重組釀酒酵母5-氨基酮戊酸合酶在大腸桿菌的表達

時間:2023-04-30 05:55:16 生物醫(yī)學論文 我要投稿
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重組釀酒酵母5-氨基酮戊酸合酶在大腸桿菌的表達

以釀酒酵母基因組為模板,采用PCR擴增出編碼成熟5-氨基酮戊酸合酶(第一個氨基酸殘基為Asn63)的基因hem1,將其克隆到pMAL-2x中構(gòu)建重組表達載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達菌株BL21(DE3),在0.5 mmol·L-1的IPTG誘導下,SDS-PAGE顯示分子量約為49 kD的特異條帶.重組菌在紫外燈下顯示紅色熒光,表明酶在大腸桿菌體內(nèi)活性表達.體外反應表明,在濃度超過0.1 mmol·L-1的IPTG誘導下,酶活力下降,培養(yǎng)基的初始pH值約為6.5,5-氨基酮戊酸產(chǎn)量達最大,且主要分泌到胞外.

作 者: 何曉梅 周靜 范軍 朱蘇文 程備久 HE Xiao-mei ZHOU Jing FAN Jun ZHU Su-wen CHENG Bei-jiu   作者單位: 安徽農(nóng)業(yè)大學生命科學學院,合肥,230036  刊 名: 安徽農(nóng)業(yè)大學學報  ISTIC PKU 英文刊名: JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL UNIVERSITY  年,卷(期): 2006 33(4)  分類號: Q786  關(guān)鍵詞: 5-氨基酮戊酸合酶   釀酒酵母   重組表達   5-氨基酮戊酸產(chǎn)量  

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