豬γ干擾素基因的合成、表達(dá)及純化

目的 通過(guò)人工合成豬γ干擾素(poIFN-γ)基因的編碼序列,提高目的蛋白的表達(dá).方法 根據(jù)poIFN-γ的氨基酸序列,選擇大腸桿菌所偏愛(ài)的密碼子,設(shè)計(jì)并合成了24個(gè)寡核苷酸片段.通過(guò)重疊區(qū)擴(kuò)增法,利用PCR合成poIFN-γ的成熟蛋白編碼基因,克隆人pGEM-7Zf(+)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1.經(jīng)測(cè)序證實(shí)后,構(gòu)建原核表達(dá)載體pBV222/poIFN-γ,并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5γ,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后,進(jìn)行SDS-PAGE分析及純化.結(jié)果 酶切及測(cè)序結(jié)果表明表達(dá)載體構(gòu)建成功,工程菌誘導(dǎo)表達(dá)后的電泳圖譜在相對(duì)分子質(zhì)量約16 500的位置出現(xiàn)明顯的目的蛋白條帶,表達(dá)產(chǎn)物主要以包涵體形式存在,約占菌體總蛋白的55%,占包涵體中總蛋白的80%,經(jīng)Ni2+-NTA親和層析純化,純度達(dá)90%以上.結(jié)論 已獲得了純度較高的目的蛋白,為下一步對(duì)豬γ干擾素進(jìn)行復(fù)性及活性研究奠定了基礎(chǔ).

作 者： 王云龍 李玲玲 李晨陽(yáng) 吳陽(yáng)   作者單位： 王云龍,李晨陽(yáng)(鄭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院,鄭州,450121;河南省生物工程技術(shù)研究中心,鄭州,450002)

李玲玲(河南省生物工程技術(shù)研究中心,鄭州,450002;河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,新鄉(xiāng),453007)

吳陽(yáng)(河南省生物工程技術(shù)研究中心,鄭州,450002;鄭州輕工業(yè)學(xué)院食品與生物工程學(xué)院,鄭州,450002) 

刊 名： 中國(guó)生物制品學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS  年，卷(期)： 2007 20(7)  分類(lèi)號(hào)： Q786 S85  關(guān)鍵詞： 豬γ干擾素   基因合成   表達(dá)   純化  

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