家蠅防御素defensin cDNA的克隆及在畢赤酵母中的表達(dá)

提取家蠅總RNA,RT-PCR擴(kuò)增編碼家蠅防御素defensin的cDNA,克隆并測定了其序列,將該cDNA序列與酵母表達(dá)載體pPICZαA重組,構(gòu)建酵母分泌型表達(dá)載體pPICZα-de,電激法轉(zhuǎn)化畢赤酵母(Pichia pastoris)受體菌GS115.經(jīng)表型篩選和PCR鑒定證明目的片段已穩(wěn)定整合到酵母染色體基因組中.在含不同濃度的Zeocin平板上篩選到高拷貝整合的轉(zhuǎn)化子,陽性克隆經(jīng)甲醇誘導(dǎo)表達(dá),用Tricine-SDS-PAGE確定了表達(dá)產(chǎn)物的正確性,瓊脂孔穴平板擴(kuò)散法、比濁法測定了表達(dá)產(chǎn)物的活性,對金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus具有一定的殺菌活性.

作 者： 金豐良 許小霞 趙士煒 古德祥 張文慶 JIN Feng-liang XU Xiao-xia ZHAO Shi-wei GU De-xiang ZHANG Wen-qing   作者單位： 中山大學(xué)有害生物控制與資源利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東,廣州,510275  刊 名： 中山大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI  年，卷(期)： 2006 45(3)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 家蠅   防御素   畢赤酵母   誘導(dǎo)表達(dá)   活性測定  

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