神經(jīng)突起因子酵母雙雜交誘餌質(zhì)粒構(gòu)建和轉(zhuǎn)化

目的構(gòu)建和轉(zhuǎn)化神經(jīng)突起因子(Neuritin)的酵母誘餌重組質(zhì)粒,為通過(guò)酵母雙雜交研究Neuritin的功能及作用機(jī)制奠定基礎(chǔ).方法用PCR擴(kuò)增neuritin全長(zhǎng)cDNA中編碼開(kāi)放讀框的基因片段;將該基因片段與pLex-A載體定向重組;用酶切和測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒;將核苷酸序列正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入EGY48[p8op-LacZ]酵母菌株.結(jié)果成功構(gòu)建pLexA-neuritin重組質(zhì)粒.轉(zhuǎn)化有重組質(zhì)粒和pLexA空載體的2種EGY48[p8op-LacZ]酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培養(yǎng)基中長(zhǎng)成白色菌落,同時(shí),轉(zhuǎn)化pLexA-pos陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒的酵母菌在相同條件下長(zhǎng)成藍(lán)色菌落,但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培養(yǎng)基中生長(zhǎng),在SD/-His/-Ura液中培養(yǎng)16 h后,A600均值均為0.9.表明重質(zhì)粒表達(dá)的融合蛋白沒(méi)有激活LEU2和lacZ酵母報(bào)告基因表達(dá)的活性,也沒(méi)有酵母毒性作用.結(jié)論構(gòu)建的誘餌重組質(zhì)�？梢杂糜谙乱浑A段的人胎腦cDNA文庫(kù)篩選.

作 者： 羅星 張峪涵 于娜 孔雪 徐堅(jiān) 顧少華 楊磊 黃瑾   作者單位： 羅星(新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室/新疆地方病與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石河子,832002;復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)院遺傳學(xué)研究所)

張峪涵,于娜,孔雪,楊磊,黃瑾(新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室/新疆地方病與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石河子,832002)

徐堅(jiān),顧少華(復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)院遺傳學(xué)研究所) 

刊 名： 中國(guó)公共衛(wèi)生  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PUBLIC HEALTH  年，卷(期)： 2006 22(4)  分類號(hào)： Q753.71  關(guān)鍵詞： 神經(jīng)突起因子   酵母雙雜交   誘餌質(zhì)粒  

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