魚腥藻Ⅱ型果糖-1,6-二磷酸醛縮酶基因的克隆及其在大腸桿菌中的高效表達

隨著更多藍藻全基因組序列測定完成,藍藻基因工程研究現(xiàn)已進入后基因組時代.2001年Kaneko等完成了魚腥藻7120全基因組序列測定,隨后人們利用生物信息學的方法對其中一些基因的功能進行了預測,包括Ⅱ型果糖-1,6-二磷酸醛縮酶(FBA)基因,但該基因是否編碼Ⅱ型果糖-1,6-二磷酸醛縮酶及該產(chǎn)物的相關(guān)酶學特性至今尚未見報道.通過PCR克隆到魚腥藻7120中預測的Ⅱ型FBA基因,插入到質(zhì)粒pET-32a的相應(yīng)位點,構(gòu)建成原核表達載體pET-FBA-Ⅱ.蛋白電泳結(jié)果顯示,重組蛋白的表達量占總蛋白含量的23.4%,與蛋白分子標記相比,其分子量約為40 kDa.酶學活性測定結(jié)果表明,其蛋白粗提物的比活力為11.8 U(mg protein)-1,具有標準Ⅱ型FBA活性.證實了Cyanobase中關(guān)于該基因功能的預測,也為進一步研究該基因表達產(chǎn)物的生理生化特性及功能提供了重要資料.

作 者： 魏蘭珍 崔軼文 馬為民 王全喜 WEI Lan-zhen CUI Yi-wen MA Wei-min WANG Quan-xi   作者單位： 上海師范大學生命與環(huán)境科學學院,上海,200234  刊 名： 中國生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(5)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 果糖-1,6-二磷酸醛縮酶   魚腥藻7120   表達   酶活  

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