含硫氨基酸基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及對百脈根的轉(zhuǎn)化

在本研究中,用限制性內(nèi)切酶Nco Ⅰ和Bgl Ⅱ從中間載體pMD18zeolin和pMD18zein 上切下zeolin基因(約1 600bp)和γ-zein基因(約720 bp),將其定向連接在經(jīng)相同酶切的質(zhì)粒載體pCAMBIA1302上,構(gòu)建成植物表達(dá)載體pCBzeolin和pCBzein.采用凍融法將pCBzeolin和pCBzein導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株LBA4404,利用該菌株轉(zhuǎn)化百脈根(Lotus corniculatus L.).經(jīng)過共培養(yǎng)、篩選分化、再生,得到抗件植株.對抗性植株進(jìn)行了PCR、RT-PCR檢測表明,γ-zein和zeolin基因已經(jīng)整合到百脈根基因組中,在核酸水平得到了表達(dá).含硫氨基酸數(shù)據(jù)分析表明,轉(zhuǎn)zeolin基因植株含硫氨基酸含量極顯著高于轉(zhuǎn)γ-zein基因植株和對照植株的含量(P＜0.01),但轉(zhuǎn)γ-zein基因植株與對照植株間差異不顯著.

作 者： 關(guān)寧 王涌鑫 李聰 苗麗宏 張博 Guan Ning Wang Yongxin Li Cong Miao Lihong Zhang Bo   作者單位： 關(guān)寧,王涌鑫,李聰,苗麗宏,Guan Ning,Wang Yongxin,Li Cong,Miao Lihong(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所牧草遺傳育種研究室,北京,100193)

張博,Zhang Bo(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)草地資源與生態(tài)自治區(qū)重點實驗室,烏魯木齊,830052) 

刊 名： 分子植物育種  英文刊名： MOLECULAR PLANT BREEDING  年，卷(期)： 2009 7(2)  分類號： Q94  關(guān)鍵詞： 含硫氨基酸基因   表達(dá)載體構(gòu)建   百脈根   轉(zhuǎn)化  

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