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鈉通道SCN1A基因短發(fā)夾RNA表達質粒的構建及其在HEK293細胞中的沉默效果
目的 采用人SCN1A基因非保守區(qū)DNA構建短發(fā)夾RNA(shRNA)穩(wěn)定表達的重組質粒,在HEK293細胞中抑制SCN1A基因表達.方法 PCR分別正反向擴增SCN1A基因特異序列,構建成一個綠色光蛋白(GFP)與發(fā)夾結構RNA(shRNA)融合表達的重組質粒pEGFP-SCN1A-shRNA;該質粒和對照質粒(pCMV-EGFP)分別與SCN1A基因表達質粒(pCMV-SCN1A)共轉染HEK293細胞株,采用半定量RT-PCR及雙熒光共定位法鑒定SCN1A基因的表達情況.結果 與對照相比較,shRNA表達質粒轉染的培養(yǎng)細胞中SCN1A基因mRNA表達量下調90%;雙熒光共定位顯示實驗組陽性細胞中只檢測到GFP蛋白,未能檢測到Nav1.1,而對照組陽性細胞中能同時檢測到GFP蛋白和Nav1.1.結論 shRNA表達質粒在培養(yǎng)細胞中能有效地抑制SCN1A基因的表達.該質粒可進一步改造成腺病毒表達載體,在動物腦組織中進行永久性表達,建立癲癇等神經系統(tǒng)疾病的動物模型,可望成為致病機理研究和開發(fā)新治療途徑的工具.
作 者： 龍躍生 孫衛(wèi)文 趙綺華 曾濤 廖衛(wèi)平 作者單位： 廣州醫(yī)學院,第二附屬醫(yī)院,神經科學研究所,廣東,廣州,510260 刊 名： 南華大學學報（醫(yī)學版） 英文刊名： JOURNAL OF UNIVERSITY OF SOUTH CHINA(MEDICAL EDITION) 年，卷(期)： 2009 37(3) 分類號： Q7 關鍵詞： RNA干擾 鈉通道 癲癇【鈉通道SCN1A基因短發(fā)夾RNA表達質粒的構建及其在HEK293細胞中的】相關文章：
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