斑節(jié)對蝦酚氧化酶原在大腸桿菌中的表達

將斑節(jié)對蝦酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)基因克隆進pET28a(+),在大腸桿菌BL21菌株中誘導表達,SDS-PAGE和Western-blotting分析均能檢測到一條分子量為79.4kDa的特異性條帶,與推導的融合蛋白理論分子量82.4kDa基本相符;包涵體變性后對經(jīng)Ni-NTA agarose純化的變性液進行復性,表現(xiàn)出0.3851U/mg.min的PO活性;不同條件下的誘導表達結果顯示,18℃時誘導培養(yǎng)能檢測到目的蛋白的可溶性表這,經(jīng)誘導9h后可溶性表達比例達到最高,約占茵體可溶性蛋白總量的5.56%;可溶性表達的目的蛋白純化后經(jīng)胰酶消化,可檢測到分子量為60kDa、42.7kDa的特異性條帶,并表現(xiàn)出O.4249U/mg.min的PO活性.

作 者： 韓鳳麗 貢成良 曹廣力 薛仁宇 HAN Feng-Li GONG Cheng-Liang CAO Guang-Li XUE Ren-Yu   作者單位： 蘇州大學醫(yī)學部,江蘇蘇州,215123  刊 名： 常熟理工學院學報  英文刊名： JOURNAL OF CHANGSHU INSTITUTE OF TECHNOLOGY  年，卷(期)： 2009 23(4)  分類號： Q344+.13  關鍵詞： 蛋白純化   proPO   原核表達   酶活性  

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