- 相關(guān)推薦
應(yīng)用PCR-酶切連接法合成全長(zhǎng)sFat1基因
人工合成基因在生命科學(xué)研究中有著重要的意義,因此基因合成是一項(xiàng)常用技術(shù).長(zhǎng)片段基因的合成比較困難,常常因?yàn)楹铣芍袎A基序列的錯(cuò)配、突變等原因而導(dǎo)致失敗.研究者們所熟知的幾種現(xiàn)行的方法仍然難以解決該問(wèn)題.本研究在作者自身的工作經(jīng)驗(yàn)中建立了一種新的基因合成方法,即PCR-酶切連接法.應(yīng)用該方法成功地將化學(xué)合成的27個(gè)寡聚核苷酸片段(每個(gè)片段長(zhǎng)60～68 bp)拼接組裝起來(lái),獲得了完整的總長(zhǎng)為1 226 bp的基因sFat-1.整個(gè)過(guò)程僅采用3輪PCR(共7個(gè)反應(yīng))、2輪的酶切連接(3個(gè)反應(yīng)),而且未曾出現(xiàn)任何偏離預(yù)期基因序列的差錯(cuò).該方法步驟較少,技術(shù)簡(jiǎn)單,出錯(cuò)極少,是合成長(zhǎng)基因序列很好的選擇.
作 者： 朱貴明 陳宏 盧建申 周艷榮 吳曉潔 陳紅星 鄧?yán)^先 ZHU Gui-Ming CHEN Hong LU Jian-Shen ZHOU Yan-Rong WU Xiao-Jie CHEN Hong-Xing DENG Ji-Xian 作者單位： 朱貴明,ZHU Gui-Ming(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,楊凌,712100;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所,北京,100071)陳宏,CHEN Hong(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,楊凌,712100;徐州師范大學(xué)細(xì)胞與分子生物學(xué)研究所,徐州,221116)
盧建申,周艷榮,吳曉潔,陳紅星,鄧?yán)^先,LU Jian-Shen,ZHOU Yan-Rong,WU Xiao-Jie,CHEN Hong-Xing,DENG Ji-Xian(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所,北京,100071)
刊 名： 遺傳 ISTIC PKU 英文刊名： HEREDITAS(BEIJING) 年，卷(期)： 2006 28(9) 分類號(hào)： Q75 關(guān)鍵詞： 基因合成 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ω-3脂肪酸去飽和酶基因【應(yīng)用PCR-酶切連接法合成全長(zhǎng)sFat1基因】相關(guān)文章：
共軛亞油酸的生物合成及相關(guān)酶基因的克隆與表達(dá)04-26
Armillariella tabescens阿拉伯糖苷酶基因全長(zhǎng)cDNA的克隆與表達(dá)04-26
日糧因素對(duì)脂肪酸合成酶(FAS)基因表達(dá)的影響04-27
轉(zhuǎn)反義Wx基因水稻穎果中與淀粉合成和積累相關(guān)酶活性的變化04-26
化學(xué)與酶促相結(jié)合合成并克隆核糖體失活蛋白Gelonin基因04-27
異源表達(dá)細(xì)菌二氫喋呤合成酶基因提高擬南芥葉酸含量的研究04-26
打頂對(duì)烤煙谷氨酰胺合成酶和天冬酰胺合成酶活性的影響04-27