Ad-vcam-1-gfP重組腺病毒轉(zhuǎn)染人臍血源基質(zhì)細胞的實驗研究

本研究探討血管細胞黏附分子(vcam-1)修飾的人臍血源基質(zhì)細胞(human umbilical cord blood derived strom cells,CBDSC)在造血調(diào)控中的作用.采用DNA重組技術(shù),將目的基因vcam-1克隆至含有報告基因gfp的穿梭質(zhì)粒;在BJ5183細胞中與pAdeasy-1質(zhì)粒進行同源重組,產(chǎn)生重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染人臍血源基質(zhì)細胞并進行鑒定.結(jié)果表明:vcam-1基因與pAdTrack-CMV載體成功連接,經(jīng)Not Ⅰ/Xho Ⅰ雙酶切后電泳可見2個大小約為9kb和2 kb左右條帶,經(jīng)PCR法擴增后電泳可見1個600 bp左右條帶,證明pAdTrack-CMV-vcam-1重組質(zhì)粒構(gòu)建成功.pAdTrack-CMV-vcam-1質(zhì)粒與pAdeasy-1質(zhì)粒同源重組后,產(chǎn)物經(jīng)PAC Ⅰ酶切后電泳可觀察到2個大小約為31 kb、4 kb左右條帶,與預(yù)期結(jié)果相符.腺病毒載體轉(zhuǎn)染人臍血源基質(zhì)細胞后免疫化學(xué)、RT-PCR、熒光顯微鏡等方法均檢測到目的基因vcam-1的表達.結(jié)論:構(gòu)建ad-vcam-1-gfp重組腺病毒載體可成功轉(zhuǎn)染人臍血源基質(zhì)細胞并使其vcam-1表達增高.

作 者： 張曦 司英健 陳幸華 劉耀 高力 高蕾 彭賢貴 王慶余 ZHANG Xi SI Ying-Jian CHEN Xing-Hua LIU Yao GAO Li GAO Lei PENG Xian-Gui WANG Qing-Yu   作者單位： 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院血液科,重慶,400037  刊 名： 中國實驗血液學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY  年，卷(期)： 2008 16(3)  分類號： Q78 Q754  關(guān)鍵詞： vcam-1   CBDSC   GFP   重組腺病毒載體  

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