細(xì)胞周期蛋白B1、D1和E真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)

目的:為研究細(xì)胞周期蛋白(cyclin)在腫瘤形成過程中的分子機(jī)制,構(gòu)建帶FLAG標(biāo)簽的細(xì)胞周期蛋白B1、D1、E的真核表達(dá)載體,并檢測其在293T細(xì)胞中的表達(dá).方法:以乳腺cDNA文庫為模板,分別擴(kuò)增細(xì)胞周期蛋白B1、D1、E基因全長編碼區(qū)序列,克隆到pcDNA3-FLAG真核表達(dá)載體上;用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法,將重組正確的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,檢測細(xì)胞中的FLAG融合蛋白的表達(dá).結(jié)果:酶切鑒定和DNA序列分析顯示構(gòu)建了正確的FLAG-Cyclin真核表達(dá)載體,Western印跡分析表明克隆的載體都能在真核細(xì)胞中表達(dá)分子大小相符的重組蛋白.結(jié)論:構(gòu)建了FLAG-CyclinB1、FLAG-CyclinD1、FLAG-CyclinE真核表達(dá)載體,為細(xì)胞周期蛋白及其相關(guān)蛋白的研究奠定了基礎(chǔ).

作 者： 熊志紅 丁麗華 袁斌 王朝云 李杰萍 楊麗萍 楊智洪 葉棋濃 XIONG Zhi-Hong DING Li-Hua YUAN Bin WANG Zhoo-Yun LI Jie-Ping YANG Li-Ping YANG Zhi-Hong YE Qi-Nong   作者單位： 熊志紅,XIONG Zhi-Hong(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,生物工程研究所,北京,100850;解放軍總醫(yī)院第二附屬醫(yī)院,結(jié)核病研究室,北京,100091)

丁麗華,袁斌,王朝云,李杰萍,楊麗萍,楊智洪,葉棋濃,DING Li-Hua,YUAN Bin,WANG Zhoo-Yun,LI Jie-Ping,YANG Li-Ping,YANG Zhi-Hong,YE Qi-Nong(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,生物工程研究所,北京,100850) 

刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 細(xì)胞周期蛋白   克隆   真核表達(dá)  

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