大鼠高親和力二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的克隆表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)定位

目的:克隆大鼠高親和力鈉依賴(lài)二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(SDCT2)的全長(zhǎng)cDNA,并明確其在腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)的定位表達(dá)情況.方法:從大鼠腎組織中提取總RNA,用帶有8肽FLAG標(biāo)簽的PCR引物通過(guò)RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出SDCT2全長(zhǎng)基因并測(cè)序,將其插入真核表達(dá)載體中構(gòu)建SDCT2真核表達(dá)載體,然后將它們轉(zhuǎn)染到腎小管上皮細(xì)胞LLC-PK1中表達(dá),并用激光共聚焦顯微鏡觀察該蛋白的亞細(xì)胞定位情況.結(jié)果:擴(kuò)增出2 kb的SDCT2全長(zhǎng)基因,Westem blot表明SDCT2基因在LLC-PK1細(xì)胞中得到了正確的表達(dá);共聚焦顯微鏡分析顯示正常SDCT2蛋白主要定位于細(xì)胞膜上,與生物信息學(xué)的預(yù)測(cè)結(jié)果一致;為了比較不同連接溫度對(duì)重組DNA連接效率的影響,觀察了3種連接溫度下的轉(zhuǎn)化效率,結(jié)果顯示溫度循環(huán)法的連接效率明顯比其他2種常規(guī)連接溫度要高.結(jié)論:高親和力鈉依賴(lài)二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白全長(zhǎng)基因被成功克隆,其主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞膜上.

作 者： 侯剴 白雪源 陳香美 馮哲 傅博 HOU Kai BAI Xue-Yuan CHEN Xiang-Mei FENG Zhe FU Bo   作者單位： 解放軍總醫(yī)院/軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院,全軍腎臟病研究所,北京,100853  刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類(lèi)號(hào)： Q78 Q735  關(guān)鍵詞： 二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白   三羧酸循環(huán)   腎小管   亞細(xì)胞定位   連接效率  

【大鼠高親和力二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的克隆表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)定位】相關(guān)文章：

血紅蛋白病氧親和力異常血紅蛋白病是什么09-08

如何培養(yǎng)親和力08-10

希望自己轉(zhuǎn)運(yùn)的說(shuō)說(shuō)02-07

運(yùn)氣不好怎么轉(zhuǎn)運(yùn)09-08

蛋白質(zhì)04-07

轉(zhuǎn)運(yùn)珠有哪些講究03-15

蛋白提取實(shí)驗(yàn)步驟03-21

克隆的作文09-07

定位自己作文02-26

定位自己作文02-26