幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)載體pET-chiB的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)

幾丁質(zhì)酶在降解幾丁質(zhì)的過(guò)程中起著重要作用,目前人們已從不同微生物體中分離并克隆出了多種幾丁質(zhì)酶基因.實(shí)驗(yàn)以pET-22b(+)為載體,利用從粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)克隆出的chiB基因,構(gòu)建出原核生物表達(dá)載體pET-chiB.通過(guò)表達(dá)載體pET-chiB的誘導(dǎo)表達(dá).實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該基因表達(dá)的蛋白為可溶性蛋白,其分子量約為52 kD.利用不同參數(shù)包括時(shí)間、IPTG濃度和溫度誘導(dǎo)表達(dá)載體pET-chiB表達(dá)并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE分析,結(jié)果顯示其誘導(dǎo)表達(dá)的最佳參數(shù)分別為4 h,0.5 mmol/L和25℃.這些結(jié)果為幾丁質(zhì)酶基因的進(jìn)一步研究和幾丁質(zhì)酶工程菌生產(chǎn)奠定了良好的工作基礎(chǔ).

作 者： 葉輝 馮春 程郢 朱蘇文 程備久 YE Hui FENG Chun CHENG Ying ZHU Su-wen CHENG Bei-jiu   作者單位： 葉輝,YE Hui(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)中心,安徽,合肥,230036;安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,安徽,合肥,230036)

馮春,FENG Chun(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)園及試驗(yàn)總場(chǎng)管理中心,安徽,合肥,230036)

程郢,朱蘇文,程備久,CHENG Ying,ZHU Su-wen,CHENG Bei-jiu(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,安徽,合肥,230036) 

刊 名： 激光生物學(xué)報(bào)  ISTIC 英文刊名： ACTA LASER BIOLOGY SINICA  年，卷(期)： 2008 17(3)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 幾丁質(zhì)酶基因   pET-chiB   構(gòu)建   表達(dá)   IPTG誘導(dǎo)   chitinase gene   pET-chiB   construction   expression   IPTG inducing  

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