MK2不同突變體的構(gòu)建、表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)定位的研究

目的:為了研究MAPK激活蛋白激酶2 (MAPK-activated protein kinase 2, MK2)細(xì)胞內(nèi)定位與其功能的關(guān)系,構(gòu)建了MK2不同突變體的綠色熒光蛋白融合表達(dá)載體并觀察這些突變體在細(xì)胞內(nèi)的定位情況. 方法:將克隆在綠色熒光蛋白載體pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通過定點突變技術(shù)構(gòu)建其無活性突變體MK2(320A)和活性突變體MK2(320E),轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞,并在熒光顯微鏡下觀察其細(xì)胞內(nèi)定位情況.結(jié)果:各種MK2不同突變體經(jīng)測序鑒定正確后,在NIH3T3細(xì)胞中得到高量表達(dá).融合蛋白發(fā)出的綠色熒光表明,在靜息狀態(tài)下,MK2(WT)主要分布于細(xì)胞核內(nèi),MK2(320E)主要分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),而MK2(320A)在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中都有分布.在受到紫外線(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的細(xì)胞內(nèi)定位則沒有發(fā)生明顯的改變.結(jié)論:成功構(gòu)建了綠色熒光蛋白標(biāo)記的MK2不同突變體并在真核細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá),觀察到不同突變體對MK2細(xì)胞內(nèi)定位的影響.

作 者： 魏潔 龔小衛(wèi) 明小燕 王旭 王達(dá)安 鄧鵬 姜勇 WEI Jie GONG Xiaowei MING Xiaoyan WANG Xu WANG Daan DENG Peng JIANG Yong   作者單位： 南方醫(yī)科大學(xué),病理生理學(xué)教研室和廣東省蛋白質(zhì)組學(xué)重點實驗室,廣東,廣州,510515  刊 名： 貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE  年，卷(期)： 2008 33(3)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： 蛋白激酶類   突變   基因表達(dá)   細(xì)胞內(nèi)定位   p38絲裂原活化蛋白激酶   MAPK激活蛋白激酶2  

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