MK2不同突變體的構(gòu)建、表達及細胞內(nèi)定位的研究

目的:為了研究MAPK激活蛋白激酶2 (MAPK-activated protein kinase 2, MK2)細胞內(nèi)定位與其功能的關(guān)系,構(gòu)建了MK2不同突變體的綠色熒光蛋白融合表達載體并觀察這些突變體在細胞內(nèi)的定位情況. 方法:將克隆在綠色熒光蛋白載體pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通過定點突變技術(shù)構(gòu)建其無活性突變體MK2(320A)和活性突變體MK2(320E),轉(zhuǎn)染NIH3T3細胞,并在熒光顯微鏡下觀察其細胞內(nèi)定位情況.結(jié)果:各種MK2不同突變體經(jīng)測序鑒定正確后,在NIH3T3細胞中得到高量表達.融合蛋白發(fā)出的綠色熒光表明,在靜息狀態(tài)下,MK2(WT)主要分布于細胞核內(nèi),MK2(320E)主要分布于細胞質(zhì)內(nèi),而MK2(320A)在細胞核和細胞質(zhì)中都有分布.在受到紫外線(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的細胞內(nèi)定位則沒有發(fā)生明顯的改變.結(jié)論:成功構(gòu)建了綠色熒光蛋白標記的MK2不同突變體并在真核細胞中進行了表達,觀察到不同突變體對MK2細胞內(nèi)定位的影響.

作 者： 魏潔 龔小衛(wèi) 明小燕 王旭 王達安 鄧鵬 姜勇 WEI Jie GONG Xiaowei MING Xiaoyan WANG Xu WANG Daan DENG Peng JIANG Yong   作者單位： 南方醫(yī)科大學,病理生理學教研室和廣東省蛋白質(zhì)組學重點實驗室,廣東,廣州,510515  刊 名： 貴陽醫(yī)學院學報  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE  年，卷(期)： 2008 33(3)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： 蛋白激酶類   突變   基因表達   細胞內(nèi)定位   p38絲裂原活化蛋白激酶   MAPK激活蛋白激酶2  

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