人偏肺病毒TaqMan-MGB探針實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用

目的:建立人偏肺病毒(hMPV)核酸特異的快速、敏感的TaqMan-MGB探針實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)方法.方法:分別設(shè)計(jì)hMPV特異的引物與熒光標(biāo)記探針,合成hMPV絕對(duì)定量RNA模板,建立實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,并與常規(guī)RT-PCR平行比較,對(duì)其靈敏性、特異性和可重復(fù)性,以及用于臨床樣本的適用性等進(jìn)行評(píng)價(jià).結(jié)果:本方法可對(duì)hMPV進(jìn)行特異性診斷,檢測(cè)靈敏度可達(dá)10拷貝/25 μL,檢測(cè)線性范圍至少可達(dá)10 1～10 6拷貝/反應(yīng),且實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好,初步應(yīng)用于北京地區(qū)采集的158份臨床鼻咽拭子標(biāo)本,定量RT-PCR檢出31份標(biāo)本陽性,明顯高于常規(guī)RT-PCR方法(22/158).結(jié)論:建立了人偏肺病毒TaqMan-MGB探針定量RT-PCR檢測(cè)方法,并初步證實(shí)可用于臨床鼻咽拭子標(biāo)本的檢測(cè),為開展hMPV的流行監(jiān)測(cè)及臨床早期診斷提供了技術(shù)手段.

作 者： 陸柔劍 張陵林 譚文杰 周為民 王仲 彭堃 阮力 LU Rou-Jian ZHANG Ling-Lin TAN Wen-Jie ZHOU Wei-Min WANG Zhong PENG Kun RUAN Li   作者單位： 陸柔劍,張陵林,譚文杰,周為民,阮力,LU Rou-Jian,ZHANG Ling-Lin,TAN Wen-Jie,ZHOU Wei-Min,RUAN Li(中國(guó)疾病預(yù)防控制中心,病毒病預(yù)防控制所,北京,100052)

王仲,WANG Zhong(北京協(xié)和醫(yī)院,北京,100730)

彭堃,PENG Kun(北京市第六醫(yī)院,北京,100007) 

刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(2)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 人偏肺病毒   TaqMan-MGB探針   實(shí)時(shí)定量PCR  

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