人類GAD67基因擴增及pEGFP-C2-GAD67真核表達載體的構(gòu)建

目的 擴增人類谷氨酸脫羧酶(GAD)67基因,并構(gòu)建pEGFP-C2-GAD67真核表達載體.方法 應(yīng)用基因重組技術(shù),采用反轉(zhuǎn)錄PCR方法對來自人類腦組織cDNA中編碼GAD67的基因片段進行擴增,插入PUC57克隆載體,經(jīng)Xho Ⅰ和BamH Ⅰ雙酶切出GAD67基因片段,再克隆入真核表達載體pEGFP-C2后構(gòu)建pEGFP-C2-GAD67重組載體,經(jīng)PCR擴增、酶切后測序鑒定. 結(jié)果 人類GAD67基因擴增產(chǎn)物大小為1 785 bp,編碼594個氨基酸殘基.重組真核表達載體經(jīng)酶切鑒定表明為正確重組子,PCR正確擴增出目的條帶.與GenBank中人類GAD67基因序列比較,核苷酸和氨基酸水平的同源性分別達99.78%和99.66%. 結(jié)論 人類GAD67基因克隆后,可成功構(gòu)建真核表達載體pEGFP-C2-GAD67,為進一步該基因轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細胞移植治療癲癇提供了實驗基礎(chǔ).

作 者： 劉智良 馬宏偉 姚志彬 徐如祥 張世忠 王嬈 LIU Zhi-liang MA Hong-wei YAO Zhi-bin XU Ru-xiang ZHANG Shi-zhong WANG Rao   作者單位： 劉智良,姚志彬,LIU Zhi-liang,YAO Zhi-bin(510275,廣州,中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院博士后流動站)

馬宏偉,徐如祥,張世忠,王嬈,MA Hong-wei,XU Ru-xiang,ZHANG Shi-zhong,WANG Rao(510282,廣州,南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院神經(jīng)外科) 

刊 名： 中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE  年，卷(期)： 2006 5(11)  分類號： Q3  關(guān)鍵詞： 谷氨酸脫羧酶(GAD)67   克隆   真核表達質(zhì)粒  

【人類GAD67基因擴增及pEGFP-C2-GAD67真核表達載體的構(gòu)建】相關(guān)文章：

八年級美術(shù)上冊《美術(shù)是人類文化的造型載體》教案10-17

共同構(gòu)建人類命運共同體的方案范文（通用5篇）12-21

棗核 教案04-25

《棗核》教案05-24

基因分身藥水作文11-17

活頁教案：當(dāng)堂達標(biāo)教學(xué)的良好載體04-25

柚核的功效與作用11-08

橙子核的功效與作用12-22

核舟記教案04-28

《棗核》教學(xué)設(shè)計04-25