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人IP-10蛋白原核表達及其活性鑒定
目的 構建人His標記的γ干擾素誘導蛋白10 (interferon-γ-inducible protein 10, IP-10)融合蛋白表達載體并在原核細胞中表達、純化,獲得有活性的IP-10蛋白,為進一步研究其在炎癥過程中的作用機制及尋找新的抗炎途徑提供基礎.方法 從人肺cDNA文庫中PCR擴增無信號肽的IP-10基因編碼序列,構建重組載體pET-14b/IP-10;重組質(zhì)粒經(jīng)酶切、測序鑒定正確后轉化大腸桿菌BL21(DE3)菌株;經(jīng)異丙基γ-D-硫代半乳糖(IPTG)誘導后,用鎳離子親和層析柱純化融合蛋白,以THP-1細胞進行微室跨膜遷移(transwell)實驗鑒定融合蛋白活性.結果 酶切、測序鑒定重組載體pET-14b/IP-10構建正確,并純化得到高純度的IP-10融合蛋白.而且該蛋白具有誘導單核細胞THP-1跨膜遷移活性.結論 成功構建了人IP-10融合蛋白表達載體,并純化得到具有活性的IP-10融合蛋白,為進一步研究IP-10的功能提供了重要的實驗材料.
作 者： 邵紫韞 彭毅 SHAO Zi-yun PENG Yi 作者單位： 邵紫韞,SHAO Zi-yun(廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院醫(yī)務部,武漢,430070)彭毅,PENG Yi(廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院心血管內(nèi)科)
刊 名： 華南國防醫(yī)學雜志 ISTIC 英文刊名： MILITARY MEDICAL JOURNAL OF SOUTH CHINA 年，卷(期)： 2008 22(4) 分類號： Q78 關鍵詞： γ干擾素誘導蛋白10 融合蛋白 細胞遷移【人IP-10蛋白原核表達及其活性鑒定】相關文章：
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