Akt1與凋亡誘導(dǎo)因子AIF相互作用的研究

目的 確定Akt1與凋亡誘導(dǎo)因子AIF是否存在相互作用及其可能的作用方式.方法 從成人肝cDNA文庫中擴(kuò)增獲得Akt1和AIF基因,構(gòu)建融合Flag標(biāo)簽的Akt1(pFlag-Akt1)和融合Myc標(biāo)簽的AIF(pMyc-AIF)真核表達(dá)重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染細(xì)胞后通過免疫共沉淀反應(yīng),檢測(cè)二者在體內(nèi)的結(jié)合情況;構(gòu)建融合GST標(biāo)簽的AIr原核表達(dá)重組質(zhì)粒,誘導(dǎo)表達(dá)并純化后獲得融合蛋白GST-AIF,通過GST-pull down實(shí)驗(yàn)檢測(cè)GST-AIF與融合Flag標(biāo)簽的Akt1蛋白在體外的結(jié)合情況;構(gòu)建融合GFP標(biāo)簽的AIF的真核表達(dá)重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染細(xì)胞,觀察在凋亡信號(hào)刺激下AIF的轉(zhuǎn)位情況,及Akt1的活化對(duì)該過程的影響.結(jié)果 察Akt1可與AIF在細(xì)胞內(nèi)、外結(jié)合,且活化的Akt1對(duì)AIF在凋亡信號(hào)刺激下的核轉(zhuǎn)位具有抑制作用.結(jié)論 活化的Akt1可能通過抑制AIF在凋亡信號(hào)刺激F的核轉(zhuǎn)位過程而發(fā)揮其抗凋亡活性.

作 者： 李圍 楊曉明 LI Wei YANG Xiaoming   作者單位： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所,北京市,100850  刊 名： 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY  年，卷(期)： 2008 5(4)  分類號(hào)： Q71  關(guān)鍵詞： 蛋門激酶B   凋亡誘導(dǎo)因子   基因的表達(dá)與構(gòu)建  

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