蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)

時間：2023-05-01 02:04:31 資料我要投稿

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毛紅麗

（襄陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院．湖北寰陽４４１０５０）

【摘要】探討了蝴垛蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)和方法。實驗證明：用幼葉在散射光下培養(yǎng)誘導(dǎo)蝴蝶蘭原球莖的效果最好，最適培養(yǎng)基為：ＭＳ＋６一ＢＡｌｏｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡｌｍｇ／Ｌ水解乳蛋白５００ｍｇ／Ｌ＋蔗培養(yǎng)基為：ＭＡ＋６一ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡｌｍｇ／Ｌ＋

３０９／Ｌ＋瓊脂７９／Ｌ（ｐＨ值５．４）；曩適增殖

解乳蛋白５００ｍｇ／Ｌ＋蔗．糖３０９／Ｌ＋瓊．．脂７９／Ｌ（ｐＨ值５．４）；曩適生根長苗培

７９／Ｌ（ｐＨ值５．４）。

養(yǎng)基：１／２ＭＳ＋ＩＢＡｌ．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ＋Ｏ．３％／ｇ＂性炭＋蔗糖３０９／Ｌ＋瓊．

［關(guān)鍵詞】蝴蝶蘭；原球莖；組織培養(yǎng)

蝴蝶蘭是單莖性氣生蘭．植株極少發(fā)育側(cè)芽，且種子極難萌發(fā)，對其進(jìn)行常規(guī)性的繁殖，增殖速度很www.szmdbiao.com慢。影響了它的推廣和應(yīng)用。筆者通過對蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)的研究。旨在提高

蝴蝶蘭的繁殖系數(shù)。

２個月后統(tǒng)計原球莖的增殖倍數(shù)和原球莖的大小。

以上培養(yǎng)基中另添加５００ｍｅ／Ｌ的水解乳蛋白。７９／Ｌ瓊脂和３０ｄＬ蔗糖，ｐＨ值５．４。培養(yǎng)條件均為２５℃，光照時間１６ｈ。光照

強(qiáng)度２０００１）【。１．３壯苗與生根

１材料與方法

將增殖培養(yǎng)所得到的蝴蝶蘭小苗轉(zhuǎn)接到各種生根培養(yǎng)基（見表４），每處理１０瓶，每瓶３株，重復(fù)３次。培養(yǎng)３０ｄ后統(tǒng)計

１．１實驗材料苗的生長情況和生根率、平均生根率。

生根培養(yǎng)基中加入０．３％的活性碳＋蔗糖３０９／Ｌ＋瓊脂７９ｎ．。

培養(yǎng)條件均為２５℃，光照時間１６ｈ．光照強(qiáng)度２０００ｈ。

從陜西省西安市鼎天農(nóng)業(yè)科技有限公司購買的大紅品系的３４月齡蝴蝶蘭幼苗。

１．２實驗方法

１．２．１外植體的消毒。從蝴蝶蘭植株上取下幼葉（分１４ｄ、３０ｄ）

２結(jié)果與分析

和氣生根尖，放在自來水下沖洗干凈。在超凈工作臺上，將葉和根尖放入無菌瓶。用７５％酒精消毒３０ｓ。然后用無菌水清洗２．３遍．再用０．１％升汞溶液浸泡ｌＯｍｉｎ（分鐘），用無菌水沖洗４—５

遍后待用。

１．２．２原球莖的誘導(dǎo)。將幼葉切成５ｘ５ｍｍ見方的小塊和１０ｒａｍ長根尖，平放或按極性接種以ＭＳ為基本培養(yǎng)基。添加激索

２．１

不同的外檀體誘導(dǎo)原球莖的差異

對蝴蝶蘭根尖、生長齡為１４ｄ的幼葉和生長齡為３０ｄ的葉

進(jìn)行原球莖的誘導(dǎo)實驗。結(jié)果表明（表１）：幼葉的誘導(dǎo)率最高為４７％。它的褐變率最低。只有６％。成熟葉的誘導(dǎo)率很低且褐化嚴(yán)

重到４７％。而根尖沒有誘導(dǎo)出原球莖�？梢娚L齡為１４，ｔ幼葉

ＮＡＡＩｍｇ／Ｌ和不同的濃度ＢＡ（２ｍＵＬ、４ｍｇ／Ｌ、６ｍｇ／Ｌ、８ｍｓ／Ｌ、１０ｍｇ／Ｌ）配比的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，并設(shè)置散射光和２０００ｈ兩種作

比較，每瓶接種一個．每處理１０瓶．重復(fù)３次。培養(yǎng)２個月后觀

最有利于原球莖的產(chǎn)生。還發(fā)現(xiàn)在同一葉片上．葉基部的切塊

較葉中和葉尖的切塊誘導(dǎo)率高。對于比較小的幼葉，未切割時

也能誘導(dǎo)出原球莖。

２．２不同濃度的ＢＡ對原球莖誘導(dǎo)的影響

選用生長齡為１４ｄ．大小為ｌｅｍ左右、葉色墩綠的葉片為誘導(dǎo)材科。滅菌后接種到含不同濃度的ＢＡ培養(yǎng)基上培養(yǎng)。堵養(yǎng)１５—２０ｄ發(fā)現(xiàn)葉片被切割周圍產(chǎn)生淺綠色的原球莖狀小突起．很次．能有效地控制菌核病的漫延。老黃葉也是菌核病和霜霉病等病害傳播源．容易將病害傳剄其他葉片，尤其受凍葉霜霉病重。摘除老黃葉則可防治或減輕菌核病等病害的發(fā)生。促進(jìn)植株的生長發(fā)育。另外。油菜生長中后期要加強(qiáng)對蚜蟲的防治，減

輕病蟲害損失。

察統(tǒng)計不同外植體在不同培養(yǎng)基中原球莖的誘導(dǎo)率及生長情況。１．２．３原球莖的增殖。將誘導(dǎo)的原球莖按３—５個為一團(tuán)接種剄以ＭＳ為基本培養(yǎng)基添加激素ＮＡＡｌｍｓａ．．和不同的濃度ＢＡ（０、２ｍｇＩＬ、４ｍｇ／Ｌ、６ｍａＬ、８ｍｇ／Ｌ、１０ｍｅ／Ｌ）配比的增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)苗肥多、長勢好的田塊一般不提倡在開春后施追肥．以免造成

貪青倒伏。

２．３加強(qiáng)病蟲害管理

菌核病是油菜的主要病害，開花期和角果發(fā)育期最易發(fā)生，一般年份可減產(chǎn)ｌ一３成．嚴(yán)重的可以造成大幅度減產(chǎn)甚至絕收．因此防治苗核病是實現(xiàn)油菜豐收的重要環(huán)節(jié)。首先要抓

好清溝排潰．捧除田間漬水．降低田問濕度．從而茂小病菌繁殖。其次是及時藥劑躊治．可選用５０％多菌靈可濕性粉卉畸０．１。

作者簡介：

張英杰（１％７一’，女．湖北璉州人，ｌ奚職生技術(shù)學(xué)院捌教授，主要從事種植專生麓學(xué)與科研工作。

０．２ｋｇ或４０％菌核凈Ｏ．１加．２ｋｇ免水５０ｋｓ。在油菜花期防治１－２

—２６一

萬方數(shù)據(jù)

墨絲塑！塑絲蘭笪絕堡墮鲞墊查

快發(fā)育成為原球莖。

由表２可知．不同濃度的ＢＡ對原球莖的誘導(dǎo)率和原球莖

的大小影響比較明品。隨著ＢＡ濃度由２ｍ班增加到１０ｍｇｌ，，原

囊＇

不同外粵體誘導(dǎo)原球莖的差異球莖的誘導(dǎo)率也由６＿３３％逐漸增大．當(dāng)ＢＡ為１０ｍｇ／Ｌ時．誘導(dǎo)率最高達(dá)４１．６７％．說明高濃度ＢＡ促進(jìn)原球莖的誘導(dǎo)。

但原球莖直徑是隨ＢＡ濃度的增大。由小到大．再由大到小。ＢＡ６ｍｇ／Ｌ時原球莖的直徑最大為３．Ｓｍｍ。ＢＡｌｏｍｇ／Ｌ時原球莖的直徑最小為０．９ｍｍ。不足１ｍｍ。在實驗中發(fā)現(xiàn)當(dāng)原球莖不足Ｉｍｍ時。很難進(jìn)一步增殖生長；誘導(dǎo)出的原球莖越大．越有利增殖生長。所以在原球莖的誘導(dǎo)實驗中。選擇ＢＡ的最佳濃度為６ｍｇ／Ｌ。

２．３不同光照條件對原球莖誘導(dǎo)的影響

在對原球莖進(jìn)行誘導(dǎo)的過程中。發(fā)現(xiàn)外植體很容易褐化。抑制葉片揭化的方法是勤換培養(yǎng)基（１０ｄ換１次）．及時將葉片移入新鮮的培養(yǎng)基．可減輕褐化狀況。培養(yǎng)時還發(fā)現(xiàn)，褐化的程度與培養(yǎng)時的光照強(qiáng)度有關(guān)，當(dāng)光照強(qiáng)度為２０００Ｉｘ時．葉片褐

化的程度較嚴(yán)重．

達(dá)４０％左右：當(dāng)光照強(qiáng)度為其他培養(yǎng)架反射過來的弱散射光時．褐化得到了較好的抑制．僅為ｌＯ％左右。

２．４不同濃度ＢＡ對原球莖增殖與誘導(dǎo)出苗的影響

將誘導(dǎo)出來的原球莖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)。表３可知．不同濃度的ＢＡ對原球莖的增殖和原球莖的大小影響比較明顯。隨著ＢＡ濃度的增加，原球莖增殖倍數(shù)逐漸增加但原球莖的大小呈先升后下降趨勢。當(dāng)ＢＡ為１０ｍ＃Ｌ時。原球莖的增殖倍數(shù)雖達(dá)到最高７．１２。但原球莖的大小最小為０．９。在原球莖增殖的同時。產(chǎn)生大量的叢生芽．但叢生芽長得較為弱小；如果降低ＢＡ的濃度．當(dāng)其為２ｍｇ／Ｌ原球莖的增殖系數(shù)減少。但形成的多而粗壯。所以ＢＡ的最佳濃度為２ｍｇ／Ｌ。

２．５原球莖的生根

壯苗

將增殖得到的小

苗轉(zhuǎn)入到生根壯苗．培養(yǎng)基中。由表４可知。

當(dāng)基本培養(yǎng)基為１，

２ＭＳ．ＮＡＡ為００５ｍｇＬ．ＩＢＡ為１．ＳｍｇＬ時。苗的生根率達(dá)到最高

５００％．且苗的生長勢最健壯。

萬方數(shù)據(jù)

宣登量茭墮

３討論

３．１

影響原球莖誘導(dǎo)的因素

在蝴蝶蘭的同體培養(yǎng)中．進(jìn)行原球莖誘導(dǎo)的外植體選擇

時．明顯地發(fā)現(xiàn)生長肥厚的幼嫩葉片的誘導(dǎo)率最為理想。這與楊美純等的研究一致。在實驗中還發(fā)現(xiàn)．葉基部的切塊較葉中和葉尖的切塊的誘導(dǎo)率高。在對葉片切割時，過多的切口會使葉片褐化死亡。所以在對幼葉切割時，將葉片從葉基部切下�？梢垣@得最高的誘導(dǎo)率。

在原球莖的誘導(dǎo)過程中。ＢＡ的濃度對原球莖的誘導(dǎo)效率和生長勢有很大的影響。在ＢＡ為０一ｌＯｍｇ／Ｌ的范圍內(nèi)．隨著ＢＡ濃度的升高原球莖的誘導(dǎo)率也在增加，但原球莖的生長勢卻不好。近年來。一些研究只報道了ＢＡ濃度對原球莖誘導(dǎo)率的影響。卻沒研究對誘導(dǎo)出的原球莖的生長勢的影響。筆者結(jié)合兩方面的比較．確定最終的ＢＡ的濃度為６ｍｇ／Ｌ．這樣誘導(dǎo)率比較高。且原球莖的生長狀況良好。為原球莖的進(jìn)一步增殖打下基礎(chǔ)。光照條件也是影響原球莖誘導(dǎo)的一個重要因素。散射光有利于原球莖的誘導(dǎo)。并能有效地減輕葉片誘導(dǎo)時的褐化狀況。３．２影響原球莖增殪的因素

在對蝴蝶蘭原球莖的增殖實驗中研究發(fā)現(xiàn)。隨著ＢＡ濃度的增加。原球莖的增殖率提高。并且在不加ＢＡ的條件下。原球莖也能增殖．這可能是原球莖自己體內(nèi)已積累了較高水平的細(xì)胞分裂素的緣故。這與周俊輝、王芳的報道一致，但與王亦菲、彭立新的結(jié)果不同。另外。從控制遺傳變異方面考慮．不應(yīng)使用高濃度的激素組合．以免原球莖多代增殖后形成異常苗。在實驗中還發(fā)現(xiàn)．原球莖在切割時。不應(yīng)切的太小．否則褐化情況嚴(yán)重。在接種時．原球莖應(yīng)緊密的靠在一起．這樣才能生長旺盛。從實驗中可以得出原球莖在增殖生長時。具有較強(qiáng)的群體優(yōu)勢效應(yīng)．與彭立心、馬子駿和周俊輝的報道一致。３．３影響蝴蝶蘭生根壯苗的因素

在蝴蝶蘭生根壯苗培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)．１，２ＭＳ比ＭＳ的效果好。ＮＡＡ濃度對出苗率沒有多大影響。活性碳的添加．可以有效防止原球莖褐化．有利于小茁的生長。參考文獻(xiàn)

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【５】