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淺談食品微生物檢驗(yàn)內(nèi)容與檢測(cè)技術(shù)分
食品微生物檢驗(yàn)
學(xué)院：食品學(xué)院
年級(jí)：10級(jí) 專業(yè)：食品質(zhì)量與安全101班 姓名：�；劬� 學(xué)號(hào)：20100844121
食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)總結(jié)
【摘 要】 微生物檢測(cè)的意義隨著人們生活水平的提高，食品安全逐漸為政府和民眾所重視。本文對(duì)食品微生物檢驗(yàn)的內(nèi)容和技術(shù)進(jìn)行分析，并探討提高和保證檢驗(yàn)的精度和靈敏度的方法。
【關(guān)鍵詞】食品；微生物檢驗(yàn)；檢驗(yàn)內(nèi)容；檢測(cè)技術(shù)
一、食品微生物檢驗(yàn)的要求 大學(xué)網(wǎng) 1、操作人員和操作細(xì)節(jié) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)聘請(qǐng)具有一定微生物學(xué)致死的的人來(lái)操作，并且要經(jīng)過(guò)考核合格后方能上崗。要求其具有較熟練的操作技能，強(qiáng)烈的質(zhì)量意識(shí)，并且嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，減少人為因素帶來(lái)的困擾。 操作要求：操作人員牢記無(wú)菌觀念，整個(gè)過(guò)程要求無(wú)菌操作，嚴(yán)格按照GB／T4789食品微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作。用無(wú)菌工具無(wú)菌操作取樣。按照 GB／T4789標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果 。
2、檢測(cè)環(huán)境和設(shè)施設(shè)備 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)具有適宜微生物檢驗(yàn)進(jìn)行的設(shè)施設(shè)備條件，包括檢測(cè)設(shè)施及輔助設(shè)施，并且要特別注意特殊的設(shè)備要在特殊的環(huán)境下放置和操作。無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)應(yīng)符合GB19489的規(guī)定，符合無(wú)回路的原則。設(shè)有人流和物流通道。在時(shí)問(wèn)和空間上有效隔離各種檢測(cè)活動(dòng)。為保證檢測(cè)樣品的完整性，操作時(shí)應(yīng)按照規(guī)定的程序并采取預(yù)處理措施。
(1)紫外線消毒：在室溫下，220V，30W紫外燈下方垂直位置lm處的253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度應(yīng)≥70μW／cm2，低于此值時(shí)應(yīng)更換，適當(dāng)數(shù)量紫外燈，確保平均每立方米應(yīng)不少于1.5W。
(2)臭氧消毒：封閉無(wú)菌室內(nèi)，無(wú)人條件下，采用20mg／m3濃度的臭氧作用時(shí)間應(yīng)≥30min，消毒后室內(nèi)臭氧濃度≤0.2mg／m2時(shí)方可人內(nèi)作業(yè)。
(3)無(wú)菌室空氣滅菌效果驗(yàn)證方法(沉降法)：一般情況下無(wú)菌室面積≤30m2時(shí)從所設(shè)定的一條對(duì)角線上選取3點(diǎn)，即中心l點(diǎn)、兩端各距墻1米處各取一點(diǎn)；無(wú)菌室面積≥30m2時(shí)選取東、南、西、北、中點(diǎn)均距墻lm各取一點(diǎn)。
3、檢測(cè)設(shè)備和檢測(cè)藥品
(1)培養(yǎng)箱、水浴鍋、于熱滅菌箱和高壓滅菌鍋的安裝要求：在首次安裝時(shí)要校對(duì)溫度的穩(wěn)定性和一致性。記錄以上設(shè)施其溫度穩(wěn)定性達(dá)到平衡時(shí)所需要的時(shí)間。要求定期對(duì)以上設(shè)備進(jìn)行清潔和消毒。最好是使用感應(yīng)器來(lái)對(duì)運(yùn)轉(zhuǎn)循環(huán)情況進(jìn)行控制和監(jiān)控。
(2)藥品配置：培養(yǎng)基采用高壓濕熱滅菌法，121℃滅菌15分鐘。部分培養(yǎng)基如膽硫乳培養(yǎng)基則需采用煮沸滅菌法。對(duì)于熱敏感的培養(yǎng)基采用膜過(guò)濾法。
4、樣品的采集、運(yùn)輸和保存 采集具有代表性的樣品，并且樣品采集必須在無(wú)菌操作下進(jìn)行，以防止樣品受到外源性污染和細(xì)菌的生長(zhǎng)。
采樣用具及包裝物必須是滅菌的。在樣品的運(yùn)輸和保存過(guò)程中應(yīng)避免日光照射，防止外來(lái)物的污染。采樣后，應(yīng)將樣品在接近原有貯存溫度條件下盡快送往實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。運(yùn)輸時(shí)應(yīng)保持樣品完整。一般不應(yīng)超過(guò)3小時(shí)。如不能及時(shí)運(yùn)送，應(yīng)在接近原有貯存溫度條件下貯存。
二、食品微生物檢驗(yàn)內(nèi)容和技術(shù) 食品微生物檢驗(yàn)的內(nèi)容
1、對(duì)食品污染程度指示菌的檢驗(yàn)。細(xì)菌總數(shù)又被稱為菌落總數(shù)，指食品及生活飲用水檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，所得1g或1mc檢樣中所含細(xì)菌菌落個(gè)數(shù)，是判斷食品及生活飲用水被污染程度的重要指標(biāo)。大腸菌群系指一群在37℃培養(yǎng)24h后能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)配、產(chǎn)氣、需氧或兼性厭氧的革蘭氏染色陰性無(wú)芽孢桿菌。其主要來(lái)源于人和牲畜的糞便，所以研究中經(jīng)常采用糞便污染指標(biāo)菌來(lái)評(píng)價(jià)生活飲用水及食品的衛(wèi)生質(zhì)量。
2、對(duì)食品中致病菌的檢測(cè)。在GB4789食品微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中，已明確規(guī)定某些微生物的數(shù)量，所以我們除要檢測(cè)食品污染程度指示菌，如菌落總數(shù)、大腸菌群(MPN)的測(cè)定外，還有致病菌如金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和志賀氏菌等。
食品微生物檢驗(yàn)的技術(shù) 多年以來(lái)，對(duì)食品微生物的檢測(cè)，通常采用瓊脂平板培養(yǎng)法，共需2—3d才能完成。近幾年各國(guó)的許多機(jī)構(gòu)和學(xué)者都致力于快速檢測(cè)技術(shù)和方法的研究，已改進(jìn)和開(kāi)發(fā)了一些快速的檢測(cè)技術(shù)和方法，提高了食品微生物檢驗(yàn)的高效性、準(zhǔn)確性和可靠性，其中新方法有以下幾種。
1、采用電阻抗法。其原理是細(xì)菌在培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)繁殖的過(guò)程中，將會(huì)使培養(yǎng)基中的火分電惰性物質(zhì)如碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂類等，代謝為具有電活性的小分子物質(zhì)，其能增加培養(yǎng)基的導(dǎo)電性，從而使阻抗發(fā)生變化，所以我們可以通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)基的電阻抗變化情況來(lái)判定細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)繁殖特性，即可檢測(cè)出相應(yīng)的細(xì)菌。該法已用于霉菌、大腸桿菌等細(xì)菌的檢測(cè)。①
2、采用快速酶觸反應(yīng)及代謝產(chǎn)物的檢測(cè)。細(xì)菌在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中可合成和釋放某些特異性的酶，所以根據(jù)其特性來(lái)選用相對(duì)應(yīng)的底物和指示劑，并記錄反應(yīng)的結(jié)果。如美國(guó)3MPetiffilmTM微生物測(cè)試片可分別快速測(cè)定細(xì)菌總數(shù)、金黃色葡萄球菌等。
3、采用分子生物學(xué)技術(shù)。其又包括兩種技術(shù)：(1)核酸探針技術(shù)。根據(jù)堿基互補(bǔ)的原則，用特定的方法測(cè)定標(biāo)記物。(2)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)。其原理為通過(guò)加熱使雙鏈DNA經(jīng)裂解成兩條單鏈，成為引物和DNA聚合酶的模板；然后降低溫度，使寡聚核苷酸引物與DNA分子上的互補(bǔ)序列退火。一般情況下退火溫度越高，擴(kuò)增特異性越好。
4、采用免疫學(xué)方法檢測(cè)細(xì)菌抗原和抗體的技術(shù)。其有三種技術(shù)：(1)熒光抗體檢測(cè)技術(shù)(IFA)，包括直接法和間接法。直接熒光抗體檢測(cè)法是在檢樣上直接滴加已知特異性熒光標(biāo)記的抗血清，經(jīng)洗滌后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。間接法是在檢樣上滴加已知細(xì)菌特異性抗血清，待作用后經(jīng)洗滌，再加入熒光標(biāo)記的抗體后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。(2)免疫酶技術(shù)(EIA)，其是將抗原、抗體特異性反應(yīng)和酶的高效催化作用原理結(jié)
合，是一種新穎且實(shí)用的免疫學(xué)分析技術(shù)。通過(guò)共價(jià)結(jié)合將酶與抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)抗原或抗體，或通過(guò)免疫方法使酶與抗酶抗體結(jié)合，形成酶抗體復(fù)合物。(3)免疫磁珠分離法 (IMS)，即應(yīng)用抗體包被的免疫磁珠，用一個(gè)磁場(chǎng)裝置收集鐵珠。
5、采用儀器法。(1)微型全自動(dòng)熒光酶標(biāo)分析儀(Mini—VIDAS)，其主要采用具有優(yōu)異的敏感性和特異性的酶聯(lián)熒光技術(shù)(ELFA)，所測(cè)的熒光與抗體中抗原的含量成正比。(2)全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng) (Vietk—AMS)。其可以同時(shí)對(duì)60-~480個(gè)樣品進(jìn)行分析，并且鑒定時(shí)間只需2～3h，這是效率非常高的一個(gè)檢驗(yàn)系統(tǒng)，并且也是今后食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)發(fā)展的一個(gè)方向。
結(jié)束語(yǔ) 近年來(lái),食物中毒事件逐年增多，隨著科技發(fā)展和人們生活水平的提高，食品安全和衛(wèi)生已經(jīng)成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。國(guó)際衛(wèi)生組織非常關(guān)注食品微生物污染問(wèn)題，食品微生物檢驗(yàn)成為了食品質(zhì)量安全控制方面的重要技術(shù)之一，對(duì)控制微生物引起的食源性疾病具有重要作用，因而加強(qiáng)食品的安全檢測(cè)就顯得更加重要。 參考文獻(xiàn)
[1]陳廣全,張惠媛,饒紅等.電阻抗法檢測(cè)食品中沙門氏菌[J].食品科學(xué),2001,22,(9):66-70.
[2]張潔梅.食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代食品科技,2005,21,(2):221-222.
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